無菌室也稱接種室,是系統(tǒng)接種、純化菌種等無菌操作的實驗室。在微生物工作中,菌種的接種移植是一項主要操作,這項操作的特點就是要保證菌種純種,防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,很易造成污染,對接種工作干擾很大。
無菌室的設置應根據(jù)既經(jīng)濟又科學的原則來設置。其基本要求有以下幾點:
(1)無菌室應有內(nèi)、外兩間,內(nèi)間是無菌室,外間是緩沖室。房間容積不宜過大,以便于空氣滅菌。內(nèi)間面積2×2.5=5m2,外間面積1×2=2m2,高以2.5m以下為宜,都應有天花板。
(2)內(nèi)間應當設拉門,以減少空氣的波動,門應設在離工作臺zui遠的位置上;外間的門也用拉門,要設在距內(nèi)間zui遠的位置上。
(3)在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上,應開一個小窗,作接種過程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道,以減少人員進出內(nèi)間的次數(shù),降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm,內(nèi)外都掛對拉的窗扇。
(4)無菌室容積小而嚴密,使用一段時間后,室內(nèi)溫度很高,故應設置通氣窗。通氣窗應設在內(nèi)室進門處的頂棚上(即離工作臺zui遠的位置),為雙層結(jié)構(gòu),外層為百葉窗,內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開啟,以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。
無菌室內(nèi)設備和用具:
(1)無菌室內(nèi)的工作臺,不論是什么材質(zhì)、用途的,都要求表面光滑和臺面水平。
(2)在內(nèi)室和外室各安裝一個紫外燈(多為30W)。內(nèi)室的紫外線燈應安裝在經(jīng)常工作的座位正上方,離地面2m,外室的紫外線燈可安裝在外室中央。
(3)外室應有的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。
(4)內(nèi)室應有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標簽紙、膠水、廢物筐等。
無菌室的滅菌消毒:
(1)薰蒸:這是無菌室*滅菌的措施。無菌室使用了較長時間,污染比較嚴重時,應進行薰蒸滅菌??捎眉兹?、乳酸或硫磺薰蒸。
(2)噴霧:在每次使用無菌室前進行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微塵飛場,并有殺菌作用??捎?%石炭酸噴霧。
(3)紫外線照射:在每次使用無菌室前進行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應開啟紫外線燈照射30~60min。
無菌室工作規(guī)程:
(1)無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上,或在使用前30min,對內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。
(2)用肥皂洗手后,把所需器材搬入外室;在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋,戴好口罩,然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。
(3)將各種需用物品搬進內(nèi)室清點、就位,用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧,返回外室,5~10min后再進內(nèi)室工作。
(4)接種操作前,用70%酒精棉球擦手;進行無菌操作時,動作要輕緩,盡量減少空氣波動和地面揚塵。
(5)工作中應注意安全。如遇棉塞著火,用手緊握或用濕布包裹熄滅,切勿用嘴吹,以免擴大燃燒;如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打碎有菌容器時,應用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面,用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。
(6)工作結(jié)束,立即將臺面收拾干凈,將不應在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后,對無菌室用5%石炭酸噴霧,或開紫外線燈照射30min。